2.2. Испытательная лаборатория

Это - специальная микробиологическая лаборатория клиники ENDO-KLINIK, которая главным образом предназначена для диагностики перипротезных инфекций. Эту лабораторию возглавляет врач-консультант, являющийся специалистом по микробиологии и эпидемиологии инфекционных болезней, который регулярно принимает участие в исследованиях, связанных с внешним контролем качества.

 

2.3. Период проведения исследования

С ноября 1994 г. по 31 декабря 1997 г. всего было тестировано 2458 трансплантатов. Для каждого трансплантата тестировали образец костной ткани, взятый после извлечения трансплантата, и дезинфицированный раствор, полученный после обработки.

Трансплантаты, для которых образец кости или жидкости, полученной после дезинфекции, не проходил тестирование, не передавались для трансплантации, т.е. выбрасывались.

 

2.4. Микробиологические исследования

2.4.1. Первичные культуры

Образец губчатого вещества кости, взятый из трансплантата при проведении операции, инкубировали в течение 14 дней при температуре 35 °C в инкубационной камере в верхнем слое культуральной среды в соответствии с описанием Лоденкампера (Lodenkamper) (1). Эти образцы осматривались и контролировались ежедневно. Культуры приготавливались в стерильных условиях в ламинарном боксе "класса 100". По окончании инкубационного периода микроскопические препараты оценивались после окрашивания по Граму и помещались в поверхностные культуры на Колумбийский кровяной агар (Difco Co., Детройт, США). Если за период наблюдения, при последующем микроскопическом анализе или в поверхностной культуре бактерии или грибы не были обнаружены, то культуру определяли как "не имеющую признаков роста" ("no growth").

Из термически дезинфицированной жидкости брали образец объемом 10 мл, инокулировали в культуральный сосуд для аэробных и анаэробных гемокультур (Hemoline VITAL duo, bioMerieux, Marcy Etoile) и инкубировали в течение 14 дней в гемокультуральной системе Vital. По окончании периода наблюдения или в случае соответствующей индикации прибора аликвоту объемом 5 мл центрифугировали при скорости 3000 об/мин, и после окрашивания по Грамму проводили микробиологический анализ. Кроме того, на Колумбийский кровяной агар в аэробных условиях и на Бруцелловый кровяной агар (Difco Co., Детройт, США) помещалась поверхностная культура. Если за период наблюдения и при последующем тестировании микроорганизмы не были обнаружены, то культуру определяли как "не имеющую признаков роста".

 

4.2. Микроорганизмы, выделенные после термической дезинфекции

Для обнаружения бактерий, оставшихся после термической дезинфекции, были использованы методы прямого обогащения. Применявшийся метод оказался пригодным для использования благодаря своей высокой чувствительности.

В трех случаях после обработки с помощью системы Lobator sd 1 были обнаружены микроорганизмы Stapylococcus spec. (CNS). Выделенные микроорганизмы были получены в течение первого месяца применения Марбургской системы костного банка. После этого первого месяца микроорганизмы не обнаруживались в течение более чем трех лет. Мы пришли к выводу о том, что наличие этих микроорганизмов было связано с проблемами, касающимися работы с препаратами при освоении новой системы (короткий период обучения), и их источником являлась кожная флора лаборантов при работе с образцами жидкости, полученной после дезинфекции.

 

5. Заключение

 

Марбургская система костного банка с использованием установки Lobator sd 1 эффективно убивает микроорганизмы, вызывающие загрязнение костных трансплантатов (головки бедренной кости), взятых от живых доноров. Кроме того, эта система термической дезинфекции способна инактивировать вегетативные формы бактерий (но не споры) и, по-видимому, особенно подходит для обработки костных аллогенных трансплантатов, взятых от живых доноров, в случаях когда ожидается, что общее количество микроорганизмов будет небольшим. Полученные нами данные убедительно показывают, что при надлежащем применении Системы костного банка Lobator использование аэробных и анаэробных культур для трансплантата больше не требуется для скрининга трансплантатов при бактериальном заражении слабопатогенными микроорганизмами. Однако эти бактериальные культуры имеют значение для внутреннего контроля процессов, а также и для скрининга трансплантатов, взятых от инфицированных доноров или зараженных высокопатогенными микроорганизмами, такими как Escherichia coli или Salmonella spec. Для минимизации риска инфекции костной ткани у реципиентов трансплантатов мы рекомендуем не использовать трансплантаты, взятые от зараженных доноров или инфицированные высокопатогенными микроорганизмами.

Методы, использующиеся для выявления микроорганизмов, должны обладать высокой чувствительностью, и следует разработать международные стандарты антимикробной обработки костных трансплантатов.

 

6. Литература

 

¹ Lodenkamper, H, Stienen, G.: Zur Therapie anaerober Infektionen. Dtsch. med. Wschr. 81 (1956)1226-1231

² Hosted, H., Kramhoft, M.U.: Microbiology of femoral head grafts in bone banks. Ugeskr

Laeger 28 (1996)62604262

³ Knaebler, H., Garrell v. T., Seipp, H. M., Ascherl, R.: Experimentelle Untersuchungen zur thermischen Desinfektion und Sterilisation allogener Knochentransplantate und deren Auswirkungen auf die biologische Wertigkeit. Der Unfallchirurg 95 (1992) 477-485

⁴ Deijkers, R. L M., Bloem, R. M., Petit, P. L. M., Brand, R., Vehmeyer, S. B. W., Veen, M. R.: Contamination of bone allografts. J Bone Joint Surg [Br] 79-B (1997) 161 -1 66

⁵ Veen, M. R., Bloem, R. M., Petit, P. L. C: Sensitivity and negative predictive value of swab cultures imusculoskeletal allograft procurement. Clinical Orthopaedics and Related Research No. 300(1994) 259-263

⁶ Garrison C. P., Morse, B.: Comparison of bacterial contamination of cadaveric bone allografts collected under operating room and morgue conditions with and without the use of a decontamination process. AATB 17th Annual Meeting 1993, Oct. 22nd – 25th, Boston, USA

⁷ Schulz, H.: Bedeutung des Menschen als Kontaminationsquelle. Pharma Techn J 1 1 (1990) 31-32

⁸ Maibach, H. J., Aly, R.: Skin Microbiology. Springer, New York, 1981, p. 234

⁹ Fitzgerald, R. H., Peterson, L. S. A., Washington II, J. A., van Scoij, R. E., Coventry, M. E.: Bacterial colonization of wounds and sepsis in total hip arthroplasty. J Bone Joint Surg A 55-A (1973) 1242-1250

¹⁰ Garrell, v. T., Mutters, R., Garbas, J., Junge, A., Gotzen, L: Optimization of microbiological screening for bacterial contamination in allogenic bone transplants - Comparative study of various microbiological investigative techniques. Manuscript as yet unpublished - personal communication, 1998.